平颏海蛇碱性磷脂酶A_2的融合表达、纯化及活性特征

 将编码平颏海蛇碱性磷脂酶A2 的基因 (PLA2 9)克隆于硫氧还蛋白基因融合表达载体pPETTRX的trxA基因的 3′末端 ,构建符合读码框的融合基因 .2 5℃下经IPTG诱导 ,该融合蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达 ,表达量达 2 0 %以上 .利用金属螯合亲和层析和凝胶过滤层析两步纯化 ,得到纯度 85%的融合蛋白 .经肠激酶切割和离子交换柱层析进一步纯化后 ,得到浓度 95%以上的成熟PLA2 9.对重组PLA2 9进行了Western印迹检测 .重组PLA2 9具有与天然PLA2 相近的酶活性 ;并具有对HL60等几种肿瘤细胞的细胞毒作用 ,这在海蛇PLA2 中是首次报道 .平颏海蛇碱性PLA2 融合表达及快速纯化系统的建立 ,为深入开展其结构与功能关系研究奠定了基础     

Sterrhurus carpentariae nov. sp. (Digenea: Hemiuridae) from Lapemis hardwickii (Serpentes: Hydrophiidae) from the eastern Gulf of Carpentaria,Australia

A new species of hemiurid is described from a sea snake.     

东海哈氏仿对虾的数量分布和生长特性研究

根据1986－1990年和1997－2001年对东海26°00′－ 33°00′N,127°00′E以西海域拖虾调查资料,共测定哈氏仿对虾样品9468尾,对哈氏仿对虾的数量分布和生长特性进行研究。结果表明,东海哈氏仿对虾的平均渔获率为458.7/g•h,其中31°00′－ 33°00′N海域最高,达到990.9/g•h,高峰期出现在秋季。主要分布在20－60m水深海域,适温范围10－24℃,适盐范围30－34,为广温广盐性虾类。周年雌虾明显多于雄虾,雌雄性比为1：0.62。雌虾个体也大于雄虾,雌虾周年平均体长和平均体重分别为71.6mm,5.0g;雄虾为57.9mm,2.3g,最大值出现在5－7月,最小值出现在9－10月。繁殖期5－9月,繁殖盛期6－7月。周年出现两次快速生长期,第一次在10-12月,其相对增长率雌虾为9.3%－17.5%,雄虾为7.9%－13.9%,第二次在翌年4－7月,雌、雄虾的相对增长率分别为4.3%－13.8%和6.2%。为合理利用该资源,宜在捕捞群体平均体长、平均体重最小值出现阶段进行保护,以提高其经济效益和生态效益。     

平颏海蛇PLA2在大肠杆菌中的融合表达

将编码平颏海蛇磷脂酶A2的基因(PLA29)分别克隆于硫氧环蛋白基因融合表达载体pThioHisC和pTRX的HP\|trxA和trxA基因的3′末端,构建符合读码框的融合表达载体pThioHisC\|PLA2和pTRX\|PLA2。25℃下经IPTG诱导,PLA2融合蛋白在两种原核系统中均能获得较高表达,但PLA2在pTRX系统下的表达量和蛋白溶解性优于pThioHisC系统。将两种系统下的表达产物进行金属螯合亲和层析纯化,Trx\|PLA2融合蛋白的纯度可达85%以上,而HPTrxPLA2不表现出对介质的亲和性,难以得到纯化。由此,将pTRX\|PLA2载体系统确立为进一步大量表达和纯化的载体系统。     

The venom and venom apparatus of the sea snake Lapemis hardwicki Gray

The venom apparatus of Lapemis hardwicki , consisting of two functional fangs, their venom glands, and associated musculature, are described. The yield of venom per snake ranged from 2.4-5.2 mg. The LD₅₀ of the crude venom varied from 0.7-1.4 mg/kg intravenously in mice. The toxicological, chemical and immunological properties of the venom are discussed.     

平颏海蛇毒的毒理学研究

用CM-sephadex C-50柱层析,醋酸铵缓冲液洗脱,从平颏海蛇(Lapemis hardwickii)毒腺提取物中分得15个蛋白组分。其中2个有磷脂酶A_2活性,用免疫学方法证实为肌肉毒组分。其中10个是能作用于突触后膜的神经毒组分。肌肉毒的蛋白质含量约占粗毒蛋白质总量的32.2％。神经毒的蛋白质含量约占粗毒蛋白质总量的52.3％。神经毒的毒性比肌肉毒的毒性强。这些结果提示,平颏海蛇毒有肌肉毒和神经毒两种。神经毒是平颏海蛇毒的主要毒性成分。     

平颏海蛇3种短链神经毒素的基因克隆与功能比较

通过构建平颏海蛇毒腺cDNA文库得到 3个编码短链神经毒素的cDNA ,sn12、sn36和sn16 0 ,它们编码6 0个氨基酸的成熟肽 ,氨基酸序列比较表明三者之间只存在第 46位氨基酸残基的差异 ,分别为Pro4 6、His4 6和Arg4 6。在大肠杆菌中重组表达以上 3种同源序列 ,重组神经毒素SN12、SN36和SN16 0对昆明小鼠 (i.p .)的半致死剂量 (LD50 )分别是 0 .0 95 6mg/kg、0 .346 7mg/kg和 0 .2 192mg/kg ;在对昆明小鼠 (i.p .)的醋酸扭体反应镇痛实验中 ,SN12和SN16 0表现出相似的效果 ,而SN36则存在明显的差异。平颏海蛇短链神经毒素SN12、SN36和SN16 0之间只存在第 46位氨基酸残基的差异 ,在生物活性上却显示出明显的区别 ,因而推测第 46位氨基酸与短链神经毒素对烟碱型乙酰胆碱受体结合功能相关     

平颏海蛇毒磷脂酶A2基因的多样性

通过对平颏海蛇毒腺cDNA文库的随机测序和PCR筛选,分离到3种未曾报道的磷脂酶A2（PLA3）cDNA,分别命名为PLA2－8,PLA2－9,PLA2－384。这些cDNA均含有完整的读码框（长度分别为456bp、438bp和438bp）,编码含27个氨基酸残基的信号肽和长度分别为4．8、7．8和8．4。氨基酸序列分析和二级结构预测表明,3种PLA2均属I类磷酯酶A2家族,其中PLA2－8与来自澳大利亚虎蛇Notechis scutatus scutatus的PLA2有81％的同源性;而PLA2－9和PLA2－384则与来自海蛇Enhydrina schistosa的肌毒PLA2有90％的同源性,这不仅预示着他们在功能上可能存在某些相似性,也反映出平颏海蛇PLA2的结构多样性。这组海蛇PLA2同功酶基因的成功克隆为进一步揭示PLA2的结构与功能关系及的分子机制提供了新的信息。